葡聚糖凝膠使用說明書

葡聚糖凝膠 LH-20

適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子，天然產物在有機溶劑中的純化。可以非常經濟的大規模制備各種天然產物，尤其在中藥有效成分提取中作為大孔吸附樹脂解析物的純化。 結合凝膠過濾﹑分配色譜及吸附層析于一身，能分離結構相近的分子。因此使用中要考略幾種色譜的作用機制。

zui高載量可達250mg樣品/ml凝膠﹑極少需要再生﹑使用得當，分離效果可保持不變。

上樣量視被分離物的結構性能的差異而定：差異大，則大；差異小，則小。凝膠過濾的上樣量一般為5-7％的床體積，我們建議初次上樣量控制在1-2％的床體積，視分離情況可以逐步增加；柱高的選擇也與分離要求相關——難分物質要有一定柱高和流速控制；流動相可參考TLC的條件，正確的流動相可以提高分離度并縮短分離時間。

流動相的常用溶劑為：水、甲醇、、乙酸乙酯、。

上述溶劑的極性依次降低，對帶有極性的被分離物而言，保留值和分離度依次遞增；同理選用的凝膠柱高可依次降低，流速可以增大（或上樣量可以增加，樹脂體積在低極性溶劑中明顯收縮）。

溶劑的溶解性，極性，沸點，毒性都是要考慮到的，二氯甲烷通常對被分離物質間的極性和堿性差異比較小時采用。甲醇通常對帶環狀（包括苯環）物質分離采用，葡聚糖凝膠對環狀物質有強烈吸附。LH-20同時具備親水和親脂雙重性質，且被分離物質的極性在分離過程中起著重要作用。

1 葡聚糖凝膠LH-20的原理

葡聚糖凝膠LH-20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因為凝膠過濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來，小分子的化合物保留強，zui后出柱。如果使用反相溶劑洗脫，葡聚糖凝膠LH-20對化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來，極性小的化合物保留強，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過濾作用來分離。

2 葡聚糖凝膠LH-20洗脫溶劑

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類：反相和正相兩種。用得zui多的是反相溶劑洗脫，以甲醇——水系統zui為常見，先用水，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱。正相系統以氯（仿）——甲醇zui為常見，先用50％氯（仿）——甲醇，逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱。

3 樣品的處理和洗脫溶劑的選擇

如果樣品極性大，選用反相溶劑洗脫（甲醇——水），樣品用zui少體積的甲醇——水（盡可能甲醇少一些）溶解，過濾后，濕法上樣（必須要進行過濾！否則把葡聚糖凝膠LH-20 堵塞，就必須將葡聚糖凝膠LH-20的柱頭部分棄去，造成不必要的浪費）。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯（仿）——甲醇），樣品用zui少體積的氯（仿）——甲醇溶解，過濾后，濕法上樣。

4 葡聚糖凝膠 LH-20的使用方法

將干粉浸泡于60-70％乙醇中過夜（充分攪拌），洗去可能存在的殘留物，抽干然后濕態不間隙裝柱，不能出現凝膠斷層（否則要重新裝柱），動態用一倍柱體積的60-70％乙醇淋洗，再用水洗凈乙醇即根據自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩為止，如改變溶劑應該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質，并根據性質確定柱高。如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。

（1） 選擇條件：

梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統；極性小者一般用不含水的系統，常用正己烷（二氯）甲烷甲醇系統。

（2）飽和層析柱：

用洗脫劑將凝膠搖勻，直立柱身，讓其自然沉降，此時要防止氣泡留在其中。至少半小時打開開關，流出幾個柱體種的洗脫劑，目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。

（3）樣品處理：

用盡量少的洗脫劑溶解樣品，常壓過濾。

（4）濕法上柱：

這也是要有技巧的步驟。
    （5）洗脫：

控制流速，一般1drop/s以下，可參見廠家的一些參數；必要時更改極性（很多時一個極性就可以將樣品洗脫完畢）。

（6）再生以備下次使用。