（技術(shù)篇）使用快速簡便的ELISA試劑盒需注意哪些?

   上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒擁有快速、簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高等幾大特點(diǎn)。ELISA實(shí)驗(yàn)條件主要由實(shí)驗(yàn)室的操作環(huán)境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但試劑盒對實(shí)驗(yàn)室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗(yàn)操作步驟都是由實(shí)驗(yàn)人員來完成的，人為的誤差相對嚴(yán)重一些。今天上海恒遠(yuǎn)小編就來分享(技術(shù)篇)使用快速簡便的ELISA試劑盒需注意哪些問題及解決辦法：

問：加入稀釋劑是否會將樣本進(jìn)一步稀釋？
答：因?yàn)橄♂寗┦羌尤氲剿械目字?，?biāo)準(zhǔn)和被測樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出，而不需作稀釋調(diào)整。

問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度？
答：靈敏度是統(tǒng)計(jì)中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗(yàn)的可變性計(jì)算出來的。靈敏度是將20個零復(fù)制物的中值加兩個標(biāo)準(zhǔn)差從標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成分析物的濃度。而zui低標(biāo)準(zhǔn)是我們可以放心的、仍可與標(biāo)準(zhǔn)曲線成直線相關(guān)的zui低點(diǎn)，因而是可定量的。

問：標(biāo)準(zhǔn)曲線為什么要采用4-pl擬合？
答：R&D在研發(fā)和質(zhì)控我們絕大多數(shù)的quantikine ELISA試劑盒時，采用4-相參數(shù)的曲線擬合。一般來說，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數(shù)據(jù)分析不可用4-pl的話，log-log是下一個的選擇。

         
問：試驗(yàn)步驟中說要用500rpm，我的搖床達(dá)不到。這個速度是正確的嗎？
答：500rpm使用的是0.12英寸的震蕩軌道。如果你的震蕩器用更大的震蕩軌道，500rpm的確是過快了。在這種情況下，你應(yīng)根據(jù)R&D Systems的建議重新調(diào)整震蕩速度。你可拿一個多余的96孔微孔板，加入洗液，洗液的量與實(shí)驗(yàn)時孔中的溶液量一致；封板后，調(diào)整震蕩器的速度，直到液體在孔的上部劇烈旋轉(zhuǎn)但不濺到封膜上或產(chǎn)生泡沫為止。

問：quantikine ELISA試劑為什么需要做稀釋？
答：① 在絕大多數(shù)的樣本中細(xì)胞因子的含量非常高，如不經(jīng)稀釋，讀數(shù)將高于標(biāo)準(zhǔn)曲線；②也是zui普遍的原因我們建議做稀釋，是將樣本中的干擾或基質(zhì)效應(yīng)稀釋掉。

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